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DC細(xì)胞

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產(chǎn)品廠地:上海市
更新時(shí)間:2025-02-21
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:458
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品牌其他品牌貨號(hào)GOY-01X1429
規(guī)格1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶供貨周期現(xiàn)貨
主要用途產(chǎn)品僅供科研使用應(yīng)用領(lǐng)域化工

冷凍保存細(xì)胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

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產(chǎn)品屬性:   

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

DC細(xì)胞

1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

GOY-01X1429

商品介紹:

名稱    DC細(xì)胞   

DC細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制如下:

a)DC可以高表達(dá)MHC-Ⅰ類和MHC-Ⅱ類分子,MHC分子與其捕獲加工的腫瘤抗原結(jié)合,形成肽-MHC分子復(fù)合物,并遞呈給T細(xì)胞,從而啟動(dòng)MHC-I類限制性CTL反應(yīng)和MHC-Ⅱ類限制性的CD4+Thl反應(yīng)。同時(shí),DC還通過其高表達(dá)的共刺激分子(CD80/B7-1CD86/B7-2CD40)提供T細(xì)胞活化所必須的第二信號(hào),啟動(dòng)了免疫應(yīng)答。

b)DCT細(xì)胞結(jié)合可大量分泌IL-12IL-18激活T細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)CTL生成,主導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答,利于腫瘤清除;激活穿孔素P顆粒酶BFasL/Fas介導(dǎo)的途徑增強(qiáng)NK細(xì)胞毒作用;

c)DC分泌趨化因子(Chemotactic CytokinesCCK)專一趨化初始型T細(xì)胞促進(jìn)T細(xì)胞聚集,增強(qiáng)了T細(xì)胞的激發(fā)。保持效應(yīng)T細(xì)胞在腫瘤部位長(zhǎng)期存在,可能通過釋放某些抗血管生成物質(zhì)(IL-12IFN-γ)及前血管生成因子而影響腫瘤血管的形成。上述CCK進(jìn)一步以正反饋旁分泌的方式活化DC,上調(diào)IL-12CD80CD86的表達(dá);同時(shí)DC也直接向CD8+T細(xì)胞呈遞抗原肽,在活化的CD4+T細(xì)胞輔助下使CD8+T細(xì)胞活化,CD4+CD8+T細(xì)胞還可以進(jìn)一步通過分泌細(xì)胞因子或直接殺傷,增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答。

DC刺激免疫反應(yīng)有以下特點(diǎn):

1.樹突狀細(xì)胞(DC)是人體內(nèi)功能*的專職抗原遞呈細(xì)胞,DC相當(dāng)于信使,將抗原信息傳遞給T細(xì)胞,并具有活化T細(xì)胞的功能,很少量就可以激發(fā)強(qiáng)大的T細(xì)胞反應(yīng)。

2.可致敏輔助T細(xì)胞的多種細(xì)胞因子,顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖,以激活體內(nèi)靜止?fàn)顟B(tài)的初始型T細(xì)胞(而巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞僅能刺激已活化的或記憶性T細(xì)胞)。

3.幫助重建腫瘤患者對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視功能。機(jī)體的免疫系統(tǒng)具有完備的監(jiān)視功能,但腫瘤細(xì)胞對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)有抵抗和抑制作用,使得免疫細(xì)胞不能識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞。在DC疫苗培養(yǎng)中用腫瘤抗原誘導(dǎo)DC使其致敏后,可將其抗原信息傳遞給T細(xì)胞,使T細(xì)胞重新識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞。

 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:

1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;

4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;

5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

 EPHB1 / EPHT2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

 SORCS1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

 KLK-8 / Kallikrein-8 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 CD32 / FCGR2B 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 CD64 / FCGR1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

 CD32b / FCGR2B 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 CD16-2 / FCGR4 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

食蟹猴 CD32a / FCGR2A 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

DC細(xì)胞分裂周期37樣蛋白1抗體Human CMLC-1(Cardiac Myosin Light Chains 1) ELISA Kit人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒,

羧肽X(M14家族1)抗體Human c-myc(c-myc Oncogene Product) ELISA Kit人球蛋白j鏈(Ig-j)ELISA試劑盒,

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白135抗體Human CNR1(Cannabinoid Receptor 1, Brain) ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ELISA試劑盒,

跨膜結(jié)構(gòu)域邊緣蛋白CEE抗體Human CNTNAP2(Contactin Associated Protein Like Protein 2) ELISA Kit小鼠多巴D1受體(D1R)ELISA試劑盒,

分子伴侶CESK1蛋白抗體Human CNTN4(Contactin 4) ELISA Kit大鼠可溶性白介素6受體(sIL-6R)ELISA試劑盒,

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體Human CNX(Calnexin) ELISA Kit大鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒,

CDK5激活結(jié)合蛋白1抗體Human COL11α1(Collagen Type XI Alpha 1) ELISA Kit大鼠生長(zhǎng)(GH)ELISA試劑盒,

化表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體Human COL13(Collagen Type XIII) ELISA Kit大鼠抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒,

 

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